Hep G2/LUC 人肝癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記

細(xì)胞特性：

1） 來(lái)源：肝細(xì)胞癌

2） 形態(tài)：上皮細(xì)胞樣，貼壁生長(zhǎng)

3） 含量：>1x106  細(xì)胞數(shù)

4） 規(guī)格：T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途：僅供科研使用。

細(xì)胞篩選

該細(xì)胞為已經(jīng)構(gòu)建好的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染Luc的細(xì)胞，隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加，其Luc熒光強(qiáng)度會(huì)逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度，可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。建議收到細(xì)胞后至少傳3代，凍存留種后再進(jìn)行篩選。初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí)，建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完培維持培養(yǎng)，若無(wú)細(xì)胞漂浮或者漂浮較少，即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完培繼續(xù)篩選，以此類(lèi)推，至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過(guò)程中，漂浮細(xì)胞大于60%，則停止篩選，換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng)，至細(xì)胞密度約80%，可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖，可停止篩選，用不含藥完培正常培養(yǎng)。

運(yùn)輸和保存：

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

（1）1mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸，收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

（2）T25瓶復(fù)蘇的存活細(xì)胞常溫發(fā)貨，收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的注意事項(xiàng)：

1）收到細(xì)胞后，75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h，若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染，請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2）請(qǐng)?jiān)?或5X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài)，同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照（10×，20×）各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存，作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3）貼壁細(xì)胞：細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h，顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)和貼壁情況，有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過(guò)程中會(huì)因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)密度若在60%以下，可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基（若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收，重懸打入到原培養(yǎng)瓶中）,加入新配制的完培6-8mL，放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長(zhǎng)密度達(dá)70%-80%以上，可以對(duì)細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過(guò)程中，若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4）備注：運(yùn)輸用的培養(yǎng)基（灌液培養(yǎng)基）不能再用來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞，請(qǐng)換用按照說(shuō)明書(shū)細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完培來(lái)培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶1：2傳代 。

培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：

1） 準(zhǔn)備MEM培養(yǎng)基；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%；雙抗，1%。

2） 培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

培養(yǎng)注意事項(xiàng)：1. hepg2細(xì)胞復(fù)蘇或傳代后會(huì)有少部分的細(xì)胞貼壁和部分懸浮的細(xì)胞，復(fù)蘇兩天后細(xì)胞會(huì)從貼壁細(xì)胞向外開(kāi)始生長(zhǎng)，有時(shí)細(xì)胞再生長(zhǎng)過(guò)程中，細(xì)胞會(huì)再貼壁細(xì)胞的上方生長(zhǎng)，形成不同的細(xì)胞層，這種情況會(huì)有發(fā)生。 在細(xì)胞復(fù)蘇的一周內(nèi)，培養(yǎng)瓶中 通常會(huì)有懸浮的活的細(xì)胞團(tuán)，在換液過(guò)程中不要丟棄在這些活的懸浮細(xì)胞，可以通過(guò)離心（125×g）回收細(xì)胞，重新打回到培養(yǎng)瓶中，分離或者丟棄漂浮的活細(xì)胞會(huì)使細(xì)胞數(shù)量變少，引起細(xì)胞的停滯生長(zhǎng)或細(xì)胞死亡。

2.培養(yǎng)條件的細(xì)微變化，尤其是pH和培養(yǎng)基中血清的質(zhì)量，可能會(huì)影響細(xì)胞的生長(zhǎng)狀況，在細(xì)胞的生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)有細(xì)胞內(nèi)的液泡出現(xiàn)，特別在細(xì)胞快要融合是會(huì)出現(xiàn)這種情況。培養(yǎng)細(xì)胞時(shí)使用未被滅活的高質(zhì)量、低內(nèi)毒素的胎牛血清，可以使細(xì)胞更好的貼壁和形成單層細(xì)胞。

3. 細(xì)胞在生長(zhǎng)過(guò)程中可以通過(guò)將血清濃度提到到20%來(lái)改善細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢的情況。（參考atcc 有關(guān)該細(xì)胞的描述）

3） 凍存液：90%血清，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。

細(xì)胞處理：

1） 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL完培的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，完培重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完培的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2） 細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

Hep G2/LUC 人肝癌細(xì)胞熒光素酶標(biāo)記

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